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自然界中存在着许许多多的微生物,我们看不见,但是我们可以人工的对它们进行培养,使它们形成菌落,让我们观察到。
在这里我们就需要引入微生物学的一个神器――培养基。
培养基是人们对于培养微生物的必不可少的神器。
人们以微生物对营养成分的需求的不同配置,引入适宜其生长繁殖的培养基。其中可以适用于所有微生物生长繁殖的,当数完全培养基,也称营养培养基。
对于培养基的分类可以分为两大种类,分别是状态和性质。
首先按状态分的话可以分为:液体培养基,固体培养基和半固体培养基。他们的区别就是固体培养基加入了凝固剂:明胶,琼脂等。
而半固体培养基就是比较粘稠,但处于固体和液体之间的一种状态的培养基。
液体培养基就是不加任何凝固剂所形成的培养基液体培养基。
其次就是按性质分,但如果按性质分可以分为:营养培养基、选择培养基、鉴别培养基。
营养培养基,也可以成为完全培养基是含有碳源、氮源、水、无机盐等各种有机物的培养基。
选择培养基,一般来说可以培养任何有机微生物的。选择培养基允许特定的微生物生长,并抑制或阻止其他微生物的生长繁殖。
鉴别培养基是鉴别作用。鉴别培养基是根据生物的特点加入某种指示剂或化学药品以鉴别不同种类生物的培养基。
这就是培养微生物的容器的大体分类,也就是培养基的分类。
对于生物培养的时候,我们还需要的就是无菌技术。无菌技术中最主要的就是:
实验时,要在酒精灯火焰旁进行。――这样可以极大地减少微生物的靠近。
对于无菌技术还可以分为两大类:
一消毒
消毒可以用较温和的方法杀死细胞,但不能杀死芽孢和孢子。
这类方法包括:煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学试剂。
消毒煮沸消毒法就是要消毒的液体烧开,或者把不溶于水的固体放入水中烧开。这样可以短时间杀死溶液中的微生物。
巴氏消毒法常用于牛奶消毒。具体操作是加热到八十摄氏度到九十摄氏度之间,但不烧开,每次十分钟,重复持续两到三次。
化学试剂消毒,使用的化学试剂包括酒精消毒、石炭酸消毒等等。
除了消毒之外,还有一种无菌操作的方法,那就是灭菌。
灭菌是指:用强烈的理化性质杀死所有微生物包括芽孢和孢子。
这种消毒方式需要借助外在工具,因为它的反应过于强烈。
二灭菌
灭菌的方法包括灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌等。
所谓灼烧灭菌,就是将使用的仪器放在酒精灯下灼烧,或者放在火下进行灼烧。这种灭菌方式,在实验室中通常用于对各种接种仪器进行灭菌,主要包括用于接种工具或者是各种金属工具或玻璃工具。比如接种环、涂布器等。
干热儿灭菌,需要使用干热灭菌锅进行灭菌。这种灭菌方式适用于实验室中的各种装置,较大型的仪器,纸质仪器等不利于灼烧的仪器。
高压蒸汽灭菌,是对于各种实验室中的物质、药品等进行灭菌,比如说培养基等。这种灭菌方式与干热灭菌锅的灭菌方式最大的不同是:存在着水蒸气。也就是说,这种灭菌方式可以防止失水,防止所需材料失去性质,但是也不利于原本是干的物品和试剂。
说白了,这二者的区别就是:干热灭菌锅不可以保持水分,是会使水分蒸干;而高压蒸汽灭菌锅可以保持水分,使水分不被蒸干。这就是二者的区别。
除此之外,实验室在开始实验之前,通常还会用紫外线照射或者结合石碳酸、煤酚皂溶液擦拭实验台进行消毒,使得无菌技术充分发挥作用。这也是不错的操作方法。
下面要唠唠的是微生物的操作制作完全培养基。
制作完全培养基时,需要的操作是(以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例):
牛肉膏蛋白胨培养基就属于营养培养基,它可以培养几乎所有微生物的生长。
在这里,以大肠杆菌的培养为例。
首先需要进行计算、称量、溶化。
这些步骤都是对牛肉膏蛋白胨培养基所需要的产品物质成分按比例进行计算,之后再装入培养皿中的过程。
其次就是灭菌,对我们所制成的牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌处理。这里的对于牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌处理不可以转换成消毒处理。因为倘若是消毒处理,培养基中仍然会存在着芽孢和孢子,这样我们不能对其判断,从而造成干扰。
之后我们将培养基放置倒置并且冷却到50度左右。我们对于这里的倒置称为倒平板。在前面已经提到了培养基选用的是高压蒸汽灭菌法,所以说在灭菌的过程中,会存在着一定量的水蒸气附着在培养皿的皿盖上(在这里要提及一下,很多人可能不知道培养皿是什么,培养皿是一种玻璃仪器,是盛装培养基的玻璃仪器),为了防止附着在培养皿的皿盖上的液体滴落到培养基中,造成污染,所以选择倒平板的方式进行防止污染。
在这个操作的全过程中,我们都需要在酒精灯火焰旁进行,目的应该不用说了。因为在之前已经说过了好多好多遍了,那就是防止杂菌污染。咱们这都是聪明绝顶的人,肯定是看了一遍就能记住。嘿嘿,我说的对不对?
培养基做好之后,便是纯化大肠杆菌。在接种大肠杆菌时,我们就要谈一谈接种方式,我们分为两种,一种是平板划线法,一种是稀释涂布平板法。
对于平板划线法的话,对于每一次划线前后都需要酒精灯加热灼烧。
并且对于平板划线而言,还需要注意:
①每一次划线时都要从上一次划线的末端开始划线,每次划线要划3到5行
②划线时第一次划线的首端与最后一次划线的末端不可相连
③不能将培养基划破
因为如果将培养基划破的话,培养基上会出现一道裂缝,在这一道裂缝当中,会进入培养液。使得大肠杆菌在裂缝中进行生长繁殖,这样就会影响所观察到的大肠杆菌的形状,影响记录的实验结果准确度。
这些就是平板划线法的注意事项。
除此之外,还存在着稀释涂布平板法。
对于稀释涂布平板法而言,我们需要的是梯度稀释,如果不进行这项操作的话,那么就会导致浓度过大,从而会影响观察。
稀释涂布平板法所需要的仪器是涂布器,涂布器使用前后也需要进行消毒。
消毒方法是将涂布器蘸取少量酒精之后,在酒精灯上灼烧,等待涂布器恢复到室温的时候,再进行稀释涂布,否则会将涂布器上的细菌全部杀死,从而观察不到菌落。
最后当我们把大肠杆菌的菌落培养出来之后,需要进行的操作,就是对大肠杆菌的菌落进行储存。储存的方法分为两种:
一种是临时出保藏法,这种保存方法是将大肠杆菌的菌落放在零下4摄氏度的冰箱当中储存。保存的时间较短。
另一种方法就是长期保存的方法,对于长期保存的方法而言,它叫做甘油管藏法。甘油管藏法脸可以储存较长时间,如果长时间不用就可以选用甘油管藏法进行冷冻保存。
在这其中也体现了一个规律,对于温度影响细菌的活性而言,低温可以抑制细菌的生长和繁殖,但不一定能杀死细菌。而高温则可以杀死细菌。
这就是微生物在实验室中培养的全过程。
是不是很简单呢?相信聪明的你已经全部明白了!
现在正是新型冠状病毒盛行的时期,所以我们也需要进行一定的保护与防护,在生活中我们可以选用消毒的方法对自己进行防护。那就可以选择70%质量分数的酒精进行自我消毒与保护,关爱自己,更是关爱他人,还是对社会的关爱!
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