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第52章 52遗传物质提取与粗分离

圆概念自源其说 采晓天 2818 2021-04-05 21:03

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  对于各种细胞的性质差异而言,主要是由DNA决定的。

  但是——

  DNA具体是什么样子的呢?所以,我们就来探讨一下DNA的粗提取与鉴定,

  首先,咱们要来分析一下DNA的状态。通过以前的大量实验,我们便已经知道了DNA的性质是白色的丝状物。

  在提取高纯度DNA时,需要应用的有十六烷基三甲基溴化氨,这个物质的简称CTAB。

  还有就是十二烷基硫酸钠简称为SBS。

  而且,对于DNA与蛋白质的溶解度而言,存在着一定的差异。具体来说,就是DNA的溶解度是在0.14摩尔每升的氯化钠溶液当中溶解度最低。

  但是——

  蛋白质却是和DNA这种溶解差异大体相反。

  蛋白质溶解度大体不变,所以在提取DNA时,可以采用改变DNA溶解度的方式从而来控制DNA的分离。

  但是DNA这种物质还不会溶于酒精溶液,这个性质和许多物质不同。

  而且DNA还具有耐高温的性质,蛋白质在60到80摄氏度时已经开始了变性失活。

  而DNA则在80摄氏度以上才会发生变性。而且,当升高到80摄氏度以上的温度之后,如果缓慢的降温,最后DNA还会随着温度的降低会缓慢复原。

  DNA不受蛋白酶的影响。蛋白酶当然是可以水解蛋白质的了,毕竟它叫蛋白酶。

  洗涤剂可以瓦解细胞膜,但是对DNA也是没有影响的。所以在我们提取DNA的过程中,也需要用洗涤剂进行洗涤,以瓦解细胞为目的。

  了解了DNA的性质,再谈谈DNA的鉴定,实际就是二苯胺试剂。并且要现配现用。否则不会有效果或者效果十分不明显。

  接下来就是具体的实验了,实验的原理就是:DNA加上二苯胺试剂后,再在水浴加热的条件下溶液会变成蓝色。

  首先是细胞的选择,选用细胞时不可以用哺乳动物的成熟红细胞。

  因为哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核和众多细胞器,所以使用哺乳动物的成熟红细胞更容易获得蛋白质,但是绝对得不到DNA。

  所以在血红蛋白的提取过程中,可以使用哺乳动物的成熟红细胞比较便利,但是提取DNA绝不可以用这种细胞。

  最后就是对细胞进行粉碎处理。

  对于动物细胞,我们可以使用水滴吸水胀破的方法进行。破碎就是向动物细胞溶液当中加入足量的蒸馏水,这样就可以使细胞破裂,从而进行粉碎。

  而植物细胞则需要加入洗涤剂还有食盐进行研磨,因为植物细胞存在的细胞壁具有保护支撑的作用,必须先将细胞壁进行一系列的操作,从而将细胞壁彻底粉碎在破裂。

  之后就是除去杂质,除去杂质大致是利用溶解度的差异。就是前面我们讲过的性质:DNA在0.14摩尔每升的氯化钠溶液中溶解度最低,而蛋白质没有这一系列的变化,从而进行分离提取。

  所以我们就会在在0.14摩尔每升的氯化钠溶液时,我们选取沉淀作为后续反应物质。

  在2摩尔每升的氯化钠溶液中,我们愿用溶液进行购物反应。

  接着我们加入嫩肉粉,因为在嫩肉粉中含有木瓜蛋白酶,这种酶可以分解蛋白质。

  这种蛋白酶可以进行蛋白质的分解。

  最后,就是要将滤液加入到60到75摄氏度的恒温水浴箱中加入要严格要求温度范围。这个过程的目的就是将蛋白质进行变性处理。从而达到过滤的目的。

  之后就要进行DNA的析出与鉴定了。

  DNA的析出需要加入百分之九十五的酒精溶液,从而可以产生白色的丝状物,这白色的丝状物就是DNA分子。

  最后就需要对DNA分子进行鉴定。那么,我们需要将白色物质用玻璃棒取出。在取出的时候一定要轻轻的搅拌,防止DNA分子断裂,从而达不到实验目的和实验现象结果。

  之后便将白色丝状物用滤纸吸干水分,放入到两摩尔每升的氯化钠溶液当中,再加入200ml二苯胺溶液进行水浴加热。

  之后就可以直接观察现象啦!

  传统工业补充一下,*^_^* 圆概念自源其说

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