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在之前我们已经知道了。各种个样的物质,但是那些没大多数都是针对于微生物的还有植物的。
所以这一回变个花样,感受一下人体的血红蛋白,一块唠唠人体的血红蛋白的分离、提取两大过程。
既然说到蛋白质了,那咱们就先了解了解蛋白质的性质差异吧。蛋白质性质差异,有啥呢?
首先人体的血红蛋白是肉眼看不到的,在显微镜下才可看到人体的血红蛋白。
血红蛋白分子的形状和大小也会有差异。比如镰刀型细胞贫血症和正常的人体血红细胞,这就是两种不同的细胞。
这就是由于蛋白质的不同,所产生的差异。
除此之外,蛋白质分子还有所带电荷的性质与多少的差异。
一会儿咱们一起唠唠这个怎么区分。
此外,对于影响蛋白质的因素,还有就是溶解度的差异。
后面会简单唠唠蛋白质与DNA的关系噢,请期待吧。
还有就是对其他分子的亲和力。
这些都是蛋白质的性质差异。那么,通常来说对于现在的我们而言,蛋白质的分离方法,用什么的是什么呢?
现在的科学是使用的让我们可以观测的方法,让我们用的是凝胶色谱法。
在凝胶色谱法中,存在着一种人工制作的特殊物质――凝胶珠。
在此过程中,所提到的凝胶珠,并不是与固定化酶技术相同的凝胶珠,这里的凝胶是指具有微小的多孔的球体的凝胶,由多糖类化合物构成的。比如说:葡聚糖、琼脂糖等。
但是这不同种的凝胶珠之间也有共同点,他们都是球形的,是不是很有意思。
而且在蛋白质的分离过程中,我们仍然需要一种仪器。这种仪器是啥呢,它叫做色谱柱。
这种仪器的结构其实可以理解为前面我们介绍的反应柱的结构。
对于色谱柱而言,我它的作用就是将不同外形的蛋白质进行分离,说得再具体点就是,色谱柱可以把大颗粒和小颗粒的蛋白质相互分离(根据体积的不同)。
那是咋整的呢?不能说是啥就是啥吧,咋招都给有点具体的依据吧。
这就是根据咱们刚才唠的那样,凝胶是啥样的的呢?凝胶是具有微小的多孔球体啊。
所以说,大颗粒的蛋白质,它会在凝胶珠的外面进行流动,因为他太大,想进小通道也进不去。
而小颗粒就容易进入。运输过程外面有液体的作用力,还有大颗粒蛋白质的作用,那我们小颗粒就不在外面走,外面怪闹腾的。所以咱们的小颗粒就进去了微小多孔的凝胶珠中了,在凝胶珠的通道当中移动。
然后怎么样?就会使得蛋白质的流动变慢。谁的呢?想一想也知道当然是小颗粒的啦,他走的弯路多呀!
小颗粒的蛋白质在穿过凝胶珠自带的多孔结构后,速度就会大大变慢。
所以说最后的现象应该是大颗粒的蛋白质先流出小颗粒的蛋白质后流出的现象。这就是分离蛋白质的原理,通过粒子大小,所进行分离。
那么刚才说了蛋白质的性质差异,有一条是电荷的性质与多少。那么咱们咋检验呢?有一种方法就可以根据电荷性质给蛋白质进行划分,这种方法叫做电泳。
听说过蛙泳、听说过蝶泳,这回又听说过电泳。
不过电泳和那两种可不一样。那两种是人在自由泳,而电泳则是蛋白质定向泳动。
那么具体的定义也是这样的:电泳指的是带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程,这叫做电泳。
它的原理是包括啥啊,电泳啊,原理啊――就是利用分子的带电性质的差异及分子本身的大小形状的不同,使得带电分子产生的迁移速度也不相同,这样可以进行对蛋白质的初步分离。
怎么样,是不是对电泳有一点模糊的理解了。电泳别看就俩字儿呀,他还分两类呢。
一类是琼脂糖凝胶电泳。一类是SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳。
其实啊,差不了多少。就是看前面那一串文字,一个是琼脂糖、一个是聚丙烯酰胺凝胶,它所用了两种凝胶,从而导致不同导致的,所以名字不同也是这个原因。
此外,正常来说,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳它的准确率应该是更大的。因为它更加高级,因为它是后研发出来的,所以它高级呀。
此外还有一个原因,就是它引进了SDS技术,使得电泳效果更加显著准确。
你想一想它的名字都那么长,它能不高级吗。要是那么长都不高级,它都对不起它自己个的名字,对吧。
紧接着,咱们就来唠一唠它的具体的实验操作吧。
实验操作是什么?这就是近代化的:血红蛋白样品的处理及粗分离的操作。
第一步:红细胞的洗涤。目的是啥,除去杂质蛋白呗。是用啥方法?是咱们好久好久以前说过一种离心法。在这里咱们就正好用用。这种方法在生物学十分常用。但是需要用低速离心的方法,要在短时间内离心。
这是因为血红蛋白太脆弱了,倘若高速离心,就会损失好多好多血红蛋白。
第二步释放血红蛋白。用啥释放啊?正常来说,咱们都用水就能吸水胀破。对吧,因为动物细胞没有细胞壁呀,对不对。^ω^
但是――
咱们也给更加讲究点儿,毕竟这怎么也是个大实验吧,用点儿高级的。
所以――
咱就不用蒸馏水了,咱就改用质量分数为40%的甲苯,并且充分搅拌。这样就能把血红蛋白给释放出来。
第三步还要进行分离。血红蛋白是出来了,但是血红细胞的皮,也就是细胞膜,还没有出去呀,所以要分离血红蛋白,还要再过滤除去细胞膜。
所以说,这个蛋白质的提取和粗分离的实验一共用了两次离心处理。第一次低速离心(防止红细胞破裂),第二次是高速离心(促使红细胞破裂)。
最后我们就是该进行最后一步了――透析。
在这一步我们要将前面制取出来的血红蛋白放到层析袋中,并且加入缓冲溶剂。
那么加入缓冲溶液为的是啥,为了维持它的环境的ph值,从而模拟出人体内的环境。使得血红蛋白保持着它原有的环境,保持原有的性质不被破坏,是这个理儿不。
这样咱们就对血红蛋白进行了处理和粗分离,这个实验完成!
最后我们就可以在层析袋中得到血红蛋白,这就是较为纯净的血红蛋白了!
在这里还要注意一个事情,在第二步的离心法使用时候,我们在分离过程中,在试管中,从上到下的物质分别是:有机溶剂、酯类物质、血红蛋白溶液、红细胞的破碎物。
所以说,为啥用过滤也知道了吧,因为这是最简单的方法,也是最快捷的得到血红蛋白的方法。
就是:先过滤出去红细胞的破碎沉淀,之后再进行分液,所以就自然而然的把血红蛋白滴落下来了,这多容易操作啊!
这就是这个实验的全部过程,怎么样,是不是很炫! 圆概念自源其说